Модуляция пептидами пролилглицилпролином и глицилпролином холинергических влияний на секреторную активность желудка | Вестн. Том. гос. ун-та. Биология. 2011. № 4 (16).

Модуляция пептидами пролилглицилпролином и глицилпролином холинергических влияний на секреторную активность желудка

Проведено изучение биологической активности пептидов пролилглицилпролина (PGP) и глицилпролина (GP) в отношении секреторной активности желудка, стимулированной карбахолином, на самцах крыс массой 180-240 г и собак массой 15-22 кг. Показано, что PGP и GP способны модулировать холинергические влияния на желудочную секрецию, причем GP обладал амбивалентной активностью. Эффект пептида определялся временным интервалом между его введением и холиномиметика: а) сочетанное введение уменьшало кислотность и содержание фукозы, но увеличивало протеолитическую активность желудочного сока; б) профилактическое введение GP за 30 мин снижало объем желудочного сока, кислотность и темп секреции Н+. Характер влияния GP определялся исходным уровнем желудочной секреции. У животных с исходно высоким уровнем секреции желудка пептид вызывал увеличение только объёма желудочного сока, тогда как у животных с исходно низкой секрецией рост объёма сока сопровождался снижением кислотности, увеличением протеолитической активности и содержания фукозы.

The modulation of cholinergic influences on gastric secretory activity by peptides prolilglycilprolin and glycilprolin.pdf ВведениеВ настоящее время существует представление о том, что регуляция и координация функций, в том числе желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), может осуществляться за счет ключевых фрагментов полипептидов, отщепляющихся от достаточно длинных молекул в соответствии с потребностями организма [1]. Особого внимания заслуживают простейшие пролинсодержащие пептиды глицилпролин (GP), пролилглицилпролин (PGP), пролилпролилглицилпролин (PPGP), выявленные сравнительно недавно [2, 3]. Они входят в состав известных регуляторных пептидов (бета-казоморфин, кальцитонин, гастрин), а также некоторых эндогенных и экзогенных белков (глюторфин, коллаген, эластин). Накопленный экспериментальный материал свидетельствует об участии глицилпролинов в поддержании гомеостаза слизистой оболочки желудка (СОЖ), оказывая противоязвенное действие[4]. Помимо этого, выявлена их способность ускорять заживление уже развившейся язвы желудка [5].В отличие от других регуляторных пептидов, глицилпролины чрезвычайно высоко стабильны (они обнаруживаются в плазме крови и через 5 ч после введения) и способны преодолевать протеолиз в ЖКТ, поступая в кровоток в неизмененном виде, поэтому есть вероятность перспективы применения их в качестве лекарственных средств [6, 7].На сегодняшний день характер действия глицилпролинов на функциональное состояние желудка недостаточно изучен. Принимая это во внимание, целью настоящей работы явилось изучение влияния PGP и GP на секреторную активность желудка, стимулированную карбахолином.Материалы и методики исследованияОстрый эксперимент был выполнен на 60 самцах крыс (линия Вистар) массой 180-240 г. У всех животных проводили операцию по наложению лигатур на пилорический отдел желудка. Операцию проводили под кратковременным эфирным наркозом, после чего через 90 мин крысам вводили пептид и стимулятор желудочной секреции. По окончании времени секреции крыс декапитировали, извлекали желудок и содержимое подвергали анализу. Хронические опыты проведены на 7 беспородных собаках (самцы) весом 15-22 кг с фистулой желудка по Басову. О секреторной функции желудка животных судили по объему отделяемого секрета, активности Н+, темпу секреции Н+, протеолитической активности желудочного сока и содержанию фукозы, которая отражает слизеобразующую функцию желудка.В проведенных исследованиях кислотность оценивалась по активности Н+, определяемой с помощью pH желудочного сока с последующим вычислением по таблице антилогарифмов и выражалась в мкмоль/мл. Кислотовыделительная функция желудка, соответствующая темпу секреции Н+, оценивалась вычислением количества выделившихся активных Н+ за определенный отрезок времени с учетом объема секрета и выражалась в ммоль [8, 9].Определение протеолитической активности желудочного сока проводили по методу Ансона и Мирского в модификации А.М. Уголева [10]. Метод основан на спектрофотометрическом определении выделившегося тирозина после инкубации в стандартных условиях желудочного сока и бычьего сывороточного лиофилизированного белка альбумина. Измерения проводили на спектрофотометре СФ-46 «ЛОМО» против контроля на длине волны 620 нм. До 95% протеолитической активности обеспечивается основным ферментом желудочного сока - пепсином. Активность пепсина выражали в мкмоль тирозина / мл желудочного сока.Концентрацию фукозы определяли по методу N. Dicshe, L. Shettles [11]. Суть метода определения фукозы заключается в образовании фурфурола иего производных (метил- и гидроксиметилфурфурол) в результате взаимодействия с концентрированной серной кислотой после гидролиза. Фураны при последующем прибавлении раствора солянокислого цистеина образуют хромоген, имеющий желто-зеленый цвет. Измерения проводили на спектрофотометре СФ-46 «ЛОМО» против контроля на длинах волн 396 и 430нм. При этом хромогены всех сахаров поглощают свет λ = 396 нм, а свет с λ= 430 нм поглощается всеми сахарами, кроме метилпентоз, к которым относится фукоза. Разница между поглощением света при 396 и 430 нм пропорциональна концентрации метилпентоз. Количество фукозы оценивали вычислением концентрации образовавшейся фукозы с учётом объема секреции желудочного сока и выражали в мкмоль.В качестве стимулятора желудочной секреции использовали карбахолин («Reanal», Венгрия), являющийся аналогом ацетилхолина - медиатора, запускающего процесс секреции. Карбахолин вводили внутримышечно крысам в дозе 25 мкг/кг, собакам - 6 мкг/кг. Вызванная секреция с момента введения стимулятора продолжалась 45 мин у крыс и 2,5 ч у собак (сок собирали каждые 30 мин, что давало возможность оценить влияние пептида на желудочную секрецию в динамике). При выборе используемых в работе доз пролинсодержащих пептидов руководствовались ранее установленными их противоязвенными эффектами [3]. PGP (предоставлен Институтом молекулярной генетики РАН, г. Москва) в дозе 1 мг/кг, GP («Senn Chemicals», Швейцария) в дозе 1 мг/кг крысам вводили внутрибрюшинно в объеме 1 мл на 200 г массы животного. Собакам GP вводили внутривенно в дозе 70 мкг/кг.Статистическая обработка результатов исследования и построение графиков выполнены с помощью прикладного пакета Statsoft STATISTICA 6.0. Вычислялись среднее значение анализируемого показателя (M), стандартная ошибка среднего (m) и критерий значимости, относительно которого определялся достигаемый уровень значимости (p). Значимость различий между выборками проводили с использованием непараметрического критерия Манна - Уитни (U-test) и критерия Стьюдента (t) (p < 0,05) [12]. Результаты исследования и обсуждениеВведение крысам PGP на фоне карабахолина увеличивало сокоотделение на 59%, темп секреции Н+ - практически в 2,5 раза, протеолитическую активность - в 5 раз и количество фукозы на 123% в желудочном секрете по сравнению с контрольными данными (р < 0,05; табл. 1).Введение GP на фоне карбахолина не вызывало значимых изменений объема желудочного сока и темпа секреции Н+, но снижало концентрацию Н+ на 36% и количество фукозы на 27%, а также увеличивало протеолитическую активность секрета в 3 раза (р < 0,05; табл. 1).Таким образом, из используемых нами глицилпролинов, в сравнительном плане, наиболее ярко в отношении секреторной активности желудка проявил себя PGP: пептид потенцировал действие карбахолина, увеличивая тем самым переваривающую способность органа. GP на фоне стимулятора, в свою очередь, обнаружил амбивалентную активность, что выражалось в снижении кислотности, слизеобразующей функции желудка наряду с усилением способности расщеплять белки.Т а б л и ц а 1Влияние PGP и GP на показатели стимулированной карбахолином желудочной секреции у крыс при одновременном поступлении в организм холиномиметика и пептидаПоказатели желудочной секрецииКонтроль - введение ФР и карбахолина, M ± m (n = 14)Введение PGP одновременно с карбахолином, M ± m (n = 10)Введение GP одновременно с карбахолином, M ± m (n = 10)Объем желудочного сока, мл4,6 ± 0,337,3 ± 0,35 *4,0 ± 0,40Концентрация Н+, мкмоль/мл62,2 ± 3,9170,2 ± 5,1240,0 ± 5,37 *Темп секреции Н+, мкмоль269,2 ± 39,17493,6 ± 50,69 *204,9 ± 34,47Протеолитическая активность, мкмоль90,9 ± 16,40518,8 ± 11,34 *285,5 ± 15,97 *Содержание фукозы, мкмоль4,4 ± 0,4410,7 ± 1,34 *3,2 ± 0,31 *Примечание. Здесь и далее в таблицах и рисунке М - среднее арифметическое значение; m - стандартная ошибка среднего арифметического; n - количество животных; ФР- физиологический раствор; звездочкой отмечено статистически значимое отличие от контрольной величины (p < 0,05).Известно, что GP активен по истечении 60 и 90 мин опыта после его введения [13] и достаточно долго существует в плазме крови [7], поэтому интересным представилось рассмотрение эффективности действия GP на стимулированную желудочную секрецию, увеличив время регистрации эффекта пептида. Дипептид вводили за 30 мин до инъекции стимулятора, что давало возможность продлить время регистрации эффекта пептида до 75 мин и сохранить время желудочной секреции (45 мин), по истечении которого получали оптимальный объем желудочного сока [14].При введении GP за 30 мин до карбахолина наблюдали снижение объема желудочного секрета на 24%, кислотности - на 41% и темпа секреции Н+ - в 2 раза (р < 0,05; табл. 2).Таким образом, эффект пептида, полученный на 75 мин действия, отличался от того, который был получен на 45 мин. Чувствительность показателей стимулированной желудочной секреции при введении GP зависела от временного интервала между инъекциями пептида и карбахолина и могла определяться временем регистрации эффекта с момента введения GP.Для подтверждения возможных особенностей изменения желудочной секреции во времени необходимо было изучить влияние GP на секреторную активность желудка в динамике соковыделения, исключив временной фактор в сочетаниях инъекций GP и карбахолина. Для выполнения данной задачи были введены в эксперимент собаки.Т а б л и ц а 2 Изменение показателей секреторной функции желудка у крыспод влиянием GP, введенного за 30 мин до карбахолинаПоказатель желудочной секрецииКонтроль - введение ФР за 30 мин до карбахолина, M ± m (n = 14)Введение GP за 30 мин до карбахолина, M ± m (n = 10)Объем желудочного сока, мл4,6 ± 0,333,5 ± 0,26 *Концентрация Н+, мкмоль/мл62,2 ± 3,9136,3 ± 5,90 *Темп секреции Н+, мкмоль269,2 ± 39,17146,3 ± 37,09 *Протеолитическая активность, мкмоль90,9 ± 16,40144,1 ± 36,68Содержание фукозы, мкмоль4,4 ± 0,443,7 ± 0,33В контрольных опытах у собак была обнаружена значительная вариабельность показателей секреторной активности желудка, что позволило разделить животных на две группы. Для собак первой группы характерна высокая секреторная активность желудка, что проявилось в значительном объёме желудочного сока с высоким темпом секреции Н+, протеолитической активностью и содержанием фукозы в желудочном секрете. Во вторую группу отнесены животные со сниженной секреторной активностью желудка и, соответственно, с низкими значениями показателей секреции по сравнению с первой группой (р < 0,05; табл. 3).Т а б л и ц а 3Контрольные показатели секреторной активности желудка у собакПоказательПервая группа собак с исходно высокой секрецией желудка, M ± m (n = 23)Вторая группа собак с исходно низкой секрецией желудка, M ± m (n = 15)Суммарный объем секрета, мл98,9 ± 7,3470,5 ± 7,53 *Концентрация H+, мкмоль/мл65,1 ± 5,8664,2 ± 2,74Темп секреции Н+, ммоль/2,5 ч7,9 ± 1,133,8 ± 0,37 *Протеолитическая активность, мкмоль7,6 ± 1,710,7 ± 0,15 *Содержание фукозы, мкмоль22,4 ± 4,0610,5 ± 1,72 *Результаты анализа желудочного содержимого в контрольных группах животных сопоставимы с результатами исследований других авторов [15-18] и полученными нами ранее данными [19].Различия между группами в характере секреторного ответа на введение стимулятора карбахолина являются отражением «индивидуальной нормы» [15], что обусловлено конституциональными особенностями гуморальной регуляции и структуры желудочных желез [20].Изменения показателей секреторной функции желудка собак после введения дипептида определялись исходным уровнем секреторной активности органа животных. У собак с исходно высокой секреторной активностью желудка введение GP на фоне карбахолина вызывало лишь увеличение объёма желудочного сока на 80% (р < 0,05; табл. 4). У собак с исходно низкой секреторной активностью желудка пептид в сочетании с карбахолином увеличивал объем секрета на 33%, протеолитическую активность - на 171% и содержание фукозы - на 49%, но уменьшал концентрацию Н+ на 15% (р < 0,05; табл. 4).Т а б л и ц а 4Влияние GP на стимулированную карбахолином желудочную секрецию у собак с разными уровнями исходной секрецииПоказатель желудочной секрецииУровень желудочной секрецииКонтроль - введение ФР и карбахолина, M ± m (n1 = 23, n2 = 15)Введение GP на фоне карбахолина, M ± m (n1 = 15, n2 = 14)Суммарный объёмВысокий98,8 ± 7,33158,7 ± 12,18 *сока, млНизкий70,5 ± 7,5399,5 ± 6,45 *Концентрация Н+,Высокий65,1 ± 5,8657,9 ± 3,99мкмоль/млНизкий64,2 ± 2,7454,3 ± 1,88 *Темп секреции Н+,Высокий7,9 ± 1,138,7 ± 0,82ммольНизкий4,1 ± 0,474,3 ± 0,65ПротеолитическаяВысокий7,6 ± 1,713,7 ± 1,09активность сока, ммольНизкий0,7 ± 0,151,9 ± 0,38 *Содержание фукозы,Высокий22,4 ± 4,0624,4 ± 3,36мкмольНизкий10,5 ± 1,7215,7 ± 1,47 *Примечание. n1, n2 - количество опытов в группах у собак с исходно высоким и низким уровнями желудочной секреции соответственно.При введении GP в динамике соковысоковыделения отмечены изменения на протяжении всего эксперимента (2,5 ч), что можно продемонстрировать на примере протеолитической активности желудочного сока у собак с исходно низкой секреторной активностью желудка (рис. 1, А). Необходимо отметить, что у собак этой группы GP вызывал как увеличение на 30 мин опыта темпа секреции Н+, так и его уменьшение на 90 мин эксперимента (рис. 1, Б). Данный факт можно считать доказательством в пользу неоднозначности влияния дипептида на изменение продукции соляной кислоты в динамике развития эффекта GP.Рис. 1. Изменения протеолитической активности (А) и темпа секреции водородных ионов (Б) в динамике у собак с исходно низкой секреторной активностью желудка после введения GP: сплошная линия - карбахолин + физиологический раствор; пунктирная - карбахолин + GPЗаключениеДипептид GP - структурный компонент трипептида PGP, обладает самостоятельной физиологической активностью в отношении желудочной секреции, которая зависит от временного интервала между введением пептида и стимулятора секреции карбахолина: а) введение GP одновременно с карбахолином уменьшало кислотность и содержание фукозы, но увеличивало протеолитическую активность желудочного сока; б) введение GP за 30 мин до карбахолина снижало объем желудочного сока, кислотность и темп секреции Н+. Характер влияния GP на секреторную активность желудка определялся исходным уровнем желудочной секреции. У животных с исходно высоким уровнем секреции желудка пептид вызывал увеличение только объёма желудочного сока, тогда как у животных с исходно низкой секрецией рост объёма сока сопровождался снижением кислотности, увеличением протеолитической активности и содержания фукозы.Таким образом, пролинсодержащие пептиды PGP и GP способны модулировать холинергические влияния на желудочную секрецию. Сохранение эффекта пептидов в течение трех часов после введения, несмотря на значительное уменьшение их концентрации в крови, вероятно, связано с высокой тропностью глипролинов к тканям желудка и высокой концентрацией их накопления в тканях этого органа [21], что может вызвать запуск каскадных реакций, которые изменяют уровень желудочной секреции в зависимости от исходной секреторной активности органа. На основании полученных результатов и данных литературы в модулирующем действии PGP и GP в отношении секреторной функции желудка в физиологических условиях могут участвовать как центральные, так и периферические механизмы регуляции [22]. Во-первых, пептиды PGP и GP могут непосредственно влиять на ткани желудка [4]. Во-вторых, они могут способствовать синтезу собственных пептидов, по физико-химическим свойствам близких к изучаемым, которые, возможно, и изменяют секреторную активность. В-третьих, эффекты PGP и GP могут осуществляться через метаболиты, образующиеся при деградации пептидов [23]. Эффекты пролинсодержащих пептидов, возможно, связаны с их способностью активировать серотонинергическую систему, увеличивать содержание дофамина и норадреналина, снижать удельную активность моноаминоксидазы Б и ацетилхолинестеразы, а также увеличивать удельную активность моноаминоксидазы А в структурах мозга [24, 25] и/или непосредственно взаимодействовать с дофаминовыми рецепторами [26]. Не исключается способность PGP и GP корректировать функциональную активность желудка посредством включения холинергических механизмови/или модулирующего влияния на эффекты ацетилхолина, изменяя чувствительность рецепторов железистых клеток к стимулятору [27].

Ключевые слова

желудочная секреция, пептиды, пролилглицилпролин, глицилпролин, карбахолин, gastric secretion, peptides, prolilglycilprolin, glycilprolin, carbachol

Авторы

ФИООрганизацияДополнительноE-mail
Замощина Татьяна АлексеевнаНациональный исследовательский Томский государственный университетпрофессор, доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии человека и животных Биологического института; профессор кафедры фармакологии Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск)beladona@hotmail.ru
Просекина Елена ЮрьевнаНациональный исследовательский Томский государственный университеткандидат биологических наук, доцент кафедры физиологии человека и животных Биологического институтаphysiol@bio.tsu.ru
Гриднева Вера ИвановнаНациональный исследовательский Томский государственный университетдоктор биологических наук, профессор, профессор кафедры физиологии человека и животных
Томова Татьяна АлександровнаТомский государственный педагогический университеткандидат биологических наук, доцент кафедры медико-биологических дисциплинeskovata@mail.ru
Всего: 4

Ссылки

Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. Волгоград : Семь ветров, 1999. 640 с.
Мешавкин В.К., Батищева Е.Ю., Кост Н.В. и др. Влияние трипептида Pro-Gly-Pro на дофаминовую систему // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2011. Т. 151, № 4. С. 410-413.
Byun H.G., Kim S.K. Structure and activity of angiotensin I converting enzyme inhibitory peptides derived from Alaskan Pollack skin // J. Biochem. Mol. Biol. 2002. Vol. 35, № 2. P. 239-243.
Доведова Е.Л., Самонина Г.Е., Монаков М.Ю. и др. Влияние трипептида Pro-Gly-Pro на катаболизм некоторых медиаторов мозга крыс при пероральном введении этанола // Нейрохимия. 1998. Т. 15, вып. 2. С. 146-151.
Ашмарин И.П., Самонина Г.Е., Бадмаева К.Е., Бакаева З.В. Регуляторные фрагменты коллагена в гомеостазе слизистой оболочки желудка // Успехи физиологических наук. 2006. Т. 37, № 2. С. 11-18.
Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Умарова Б.А. Трипептид Pro-Gly-Pro и гомеостаз слизистой оболочки желудка // Нейрохимия. 2008. Т. 25, №1. С. 128-131.
Ашмарин И.П., Багликова К.Е., Эдеева С.Е., Золотарев Ю.А. Сравнительный анализ распределения глипролинов при разных способах введения // Биоорганическая химия. 2008. Т. 34, № 4. С. 464-470.
Дорофеев Г.И., Успенский В.М. Гастродуоденальные заболевания в молодом возрасте. М. : Медицина, 1984. 214 с.
Замощина Т.А., Никифоров Л.А., Просекина Е.Ю., Томова Т.А. Биологическая активность спиртовых извлечений из ряски малой в отношении процессов воспаления // Вестник Томского государственного университета. Биология. 2011. № 2 (14). С. 73-81.
Кривова Н.А., Заева О.Б., Ходанович М.Ю. и др. Состояние слизистой оболочки желудка, про- и антиоксидантной активности и биохимических показателей крови у крыс после скармливания нано- или микрочастиц диоксида титана // Вестник Томского государственного университета. Биология. 2011. № 2 (14). С. 81-95.
Somarundaram K., Ganguly A.K. Gastric mucosal protection during restraint stress in rats: alteration in gastric adherent mucus and dissolved mucus in gastric secretion // Hepato-gastroenterol. 1985. Vol. 32. P. 24-26.
Кривова Н.А., Дамбаев Г.Ц., Хитрихеев В.Е. Надэпителиальный слизистый слой желудочно-кишечного тракта и его функциональное значение. Томск : РАСКО, 2002. 316 с.
Бесядовский Р.А., Иванов К.В., Козюра А.К. Справочное руководство для радиобиологов. М. : Атомиздат, 1978. 128 с.
Гриднева В.И. Значение исходного уровня показателей желудочной секреции для реактивности секреторного аппарата желудка в ответ на действие возмущающих факторов // Доклады Академии наук Высшей школы России. 2004. № 2 (3). С. 106-118.
Лакин Г.Ф. Биометрия : учеб. пособие для биол. спец. вузов. М. : Высш. шк.., 1990. 352 с.
Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Сергеев В.И. Коррекция кровотока желудка как один из возможных механизмов противоязвенных эффектов коротких пролинсодержащих пептидов // Российский физиологический журнал. 2001. Т. 87, № 11. С. 1488-1492.
Коротько Г.Ф. Введение в физиологию ЖКТ. Ташкент : Мед., 1987. 220 с.
Уголев А.М. Исследование пищеварительного аппарата у человека. Л. : Наука, 1969. 216 с.
Мыш В.Г. Секреторная функция желудка и язвенная болезнь. Новосибирск : Наука, 1987. 176 с.
Канищев П.А., Коваленко Л.Г. О темпе желудочной секреции водородных ионов // Лабораторное дело. 1977. № 12. С. 707-710.
Золотарев Ю.А., Жуйкова С.Е., Ашмарин И.П., Мясоедов Н.Ф. Метаболизм пептида PGP при разных способах введения // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. Т. 135, № 4. С. 423-426.
Фалалеева Т.М., Самонина Г.Е., Береговая Т.В. и др. Влияние глипролинов PGP, GP, PG на гомеостаз слизистой оболочки желудка при этаноловой модели язвообразования у крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т. 149, № 6. С. 637-639.
Труфанова А.В., Багликова К.Е., Бакаева З.В. Гистоморфологические особенности ускорения заживления ацетатных язв глипролинами // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. Т. 144, № 8. С. 226-228.
Falalyeyeva T.M., Samonina G.E., Beregovaya T.B. et al. Effect of glyprolines on homeostasis of gastric mucosa in rats with stress ulcers // Bulletin of experimental biology and medicine. 2010. Vol. 149, № 1. P. 30-33.
Ашмарин И.П., Каразеева Е.П., Ляпина Л.А., Самонина Г.Е. Регуляторная активность простейших пролинсодержащих пептидов PG, GP, PGP и GPGG и возможные источники их биосинтеза // Биохимия. 1998. Т. 63, вып. 2. С. 149-155.
Ашмарин И.П., Каразеева Е.П. Новые роли высокостабильных олигопептидов, нейротрофинов и иммуномодуляторов в регуляторном континууме // Успехи физиологических наук. 2003. Т. 34, № 1. С. 14-19.
Тутельян В.А., Хавинсон В.Х., Малинин В.В. Физиологическая роль коротких пептидов в питании // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. Т. 135, № 1. С. 4-10.
 Модуляция  пептидами пролилглицилпролином и глицилпролином холинергических влияний  на секреторную активность желудка | Вестн. Том. гос. ун-та. Биология. 2011. № 4 (16).

Модуляция пептидами пролилглицилпролином и глицилпролином холинергических влияний на секреторную активность желудка | Вестн. Том. гос. ун-та. Биология. 2011. № 4 (16).

Полнотекстовая версия