Особеннос тиадаптивно-интегративной реакции кожныхтрансплантатов под воздействием эплира | Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. 2011. № 3 (38).

Особеннос тиадаптивно-интегративной реакции кожныхтрансплантатов под воздействием эплира

В эксперименте исследованы тканевые реакции кожных трансплантатов после различных способов пересадки под воздействием 1 % масляного раствора экстракта полярных липидов иловых сульфидных грязей (эплир). Изучены реакция сосудистого русла, реактивность и особенности взаимодействия фибробластов, макрофагов, тканевых базофилов кожных трансплантатов. Воздействие эплира существенно улучшает и стимулирует адаптивно-интегративную реакцию пересаженных трансплантатов, а также снижает количество постоперационных осложнений.

Peculiaritiesof Adaptive-Integrative Reactionof Skin Transplants under Eplir Infuence.pdf ВВЕДЕНИЕИзучение морфофункциональных изменений кожных трансплантатов имеет важное значение как для практической, так и для фундаментальной медицины. На сегодняшний день имеется большое количество исследований, посвященных изучению реакции и взаимодействия тканевых элементов в пересаженном кожном трансплантате, при которых осуществляется сопряжение воспаления, регенерации и контракции раны - основных компонентов целостной тканевой реакции на повреждение [9, 10].Знание системности и особенностей тканевых и ультраструктурных реакций пересаженного комплекса в ходе его адаптации и интеграции позволит эффективно воздействовать на эти процессы и существенно облегчить поиск иизучение их стимуляторов. Таким стимулятором может являться 1 % масляный раствор экстракта полярных липидов иловых сульфидных грязей (эплир), представляющий собой высокоминерализованный осадок донных отложений пресноводных озер (ООО «Биолит», г. Томск). Широкий спектр биологически активных компонентов эплира (фосфолипиды, каротиноиды, ненасыщенные жирные кислоты, простагландины и др.) обусловливает его ангиогенное, антигипоксиче-ское, противовоспалительное и иммуномодули-рующее действия [4, 6, 7].В связи с отсутствием в литературе данных о непосредственном влиянии эплира на приживление кожных трансплантатов цель данного исследования состояла в изучении морфофизиоло-гических реакций тканей кожного лоскута после его пересадки под воздействием 1 % масляного раствора эплира.МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫЭксперименты проведены на половозрелых беспородных белых крысах (массой 200-210 г) обоего пола в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». Операции и выведение из эксперимента осуществлялись под внутримышечным наркозом «Zoletil-50»® в дозе 2 и 5 мг, соответственно (Verbac, Франция). Животные были распределены на 5 групп: 1-й группе (n = 48) проведена трансплантация несвободного аксиального пахового лоскута (НАПЛ); 2-й (n = 55) - реплантация свободного аксиального пахового лоскута (САПЛ), 3-й (n = 48) - трансплантация НАПЛ с аппликацией эплира, 4-й (n = 56) - реплантация САПЛ с аппликацией эплира, у животных 5-й группы (n = 24) забирали кожу паховой области, которая служила контролем. Трансплантацию НАПЛ осуществляли в 3 этапа: I - «подъем лоскута» по методике F. Finseth [11] на поверхностном надчревном сосудисто-нервном пучке, II - транспозиция, III - ушивание в реципиентном ложе. Реплантацию САПЛ производили в 4 этапа: I - выкраивание лоскута и выделение сосудистой ножки (поверхностные эпигастральные сосуды на бедренных сосудах) по P. G. van der Sloot, II - лигирование и пересечение бедренных сосудов и поверхностного кожного эпигастраль-ного нерва без дальнейшего восстановления его целостности, III - реанастомозирование сосудов «конец-в-конец», IV - реплантация лоскута к донорскому ложу [5, 12, 14]. Длительность операций 1-й, 3-й групп составляла 45-60 мин; 2-й, 4-й групп - 2 час 45 мин, время пережатия сосудов при выполнении микрососудистых анастомозов составило 30-45 минут. Животным 1-й, 2-й групп раны обрабатывали раствором «Антисептин» и накладывали стерильную повязку. Крысам 3-й, 4-й групп наносили 0,5 мл 1 % масляного раствора эплира на лоскут с захватом 1 см реципиентной зоны, после чего накладывали сухую стерильную повязку (ежедневно с 1-х по 7-е сут после операции). Швы снимали по показаниям: в 1-й, 2-й группах на 7-е сут после операции, в 3-й, 4-й - на 5-е сут. Животных выводили из эксперимента и забирали материал лоскутов через 3, 5, 7, 10, 14, 30 сут после операций.Морфофункциональные изменения сосудов лоскута исследовали на инъецированных массой Героты макропрепаратах, оценивая характер хода, наличие анастомозов, дилатаций, подсчитывали численную плотность сосудовартериального и венозного русел на 1 мм2, включая сосуды микроциркуляции. Для исследования тканевых реакций материал фиксировали в 12 % растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа. Депарафинированные гистологические срезы толщиной 7-10 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Подсчитывали численную плотность фибробластов (в 50 полях зрения с пересчетом количества клеток на 1 мм2, ×400). Удельную площадь сосудов кожи лоскутов с явлениями полнокровия, стаза, сладжа и тромбоза высчитывали с помощью окулярной измерительной сетки Автандилова. Гликоген и нейтральные гликопротеиды выявляли с помощью ШИК-реакции, гликозаминогликаны - окраской аль-циановым синим (рН 1,0; 2,5), эластические элементы - орсеином. Для ультраструктурного исследования материал фиксировали в 2,5 % глютаральдегиде, забуференном на 0,2 М ка-кодилатном буфере (рН 7,2) с постфиксацией в 1 % растворе четырехокиси осмия и заливкой в аралдит-эпон. Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим. Ультраструктуру лоскутов изучали на трансмиссионном электронном микроскопе «JEM-100 CXII» («JEOL», Япония). Полученные результаты обрабатывали в программе «Statistica 6.0». Для описания данных использовали медиану (Ме), нижний квартиль (LQ) и верхний квартиль (UQ). Для определения достоверности применяли критерии Круска-ла-Уоллиса и Манна-Уитни.РЕЗУЛЬТАТЫКлинические исходы пересадок паховых лоскутов представлены в табл. 1. У групп животных с применением 1 % масляного раствора эплира (3-я, 4-я группы) полная эпителизация постоперационных ран наблюдалась к 8-10-м сут, что на 2-3-е сут ранее, чем в группах с асептической обработкой ран (1-я, 2-я группы). Процент приживления лоскутов у крыс в 3-й, 4-й группах составил 100 %. Основной причиной осложнений и отторжений лоскутов 1-й и 2-й групп стали сосудистые нарушения, повлекшие развитие краевого и тотального некрозов (7,2 % и 7,3 %, соответственно).Отличительными критериями морфофизио-логической реакции пересаженных трансплантатов всех групп при качественно-идентичной картине были степень выраженности и длительность. Учитывая имеющиеся экспериментальные данные выполненных ранее работ, сопоставленныес результатами других авторов, адаптивно-ин-тегративная реакция пересаженных кожных лоскутов в данном эксперименте укладывалась в рамки типичной для данного процесса периодизации: I период - период острых сосудистых нарушений и травматического воспаления - адаптация лоскута (1-7-е сут); II - период образования сосудистых связей и пролиферации основных клеточных элементов - адаптация и интеграция лоскута (5-14-е сут); III - период окончательной перестройки сосудистого русла и реорганизации лоскута - его интеграция (с 14-х сут) [1, 5, 9].1. Адаптация трансплантированного комплекса тканей начинается в интраоперационном периоде и в лоскутах 1-й, 3-й групп проявляется сначала спазмом (несколько секунд), затем расширением сосудов, что было зафиксировано визуально во время операции. После реперфузиисвободного лоскута (2-я, 4-я группы) кратковременная вазодилатация сменяется распространенным сосудистым спазмом (до 2-3 сут), после чего сосуды вновь расширяются. В лоскутах всех групп отмечается блокада сосудов микро-циркуляторного русла, выраженная на периферии. Удельная площадь сосудов с явлениями стаза, сладжа и тромбоза возрастает практически в 2 раза по сравнению с контролем в 1-й и 3-й группах, и в 1-й, 4-й и 1,6 раза во 2-й и 4-й, соответственно. Стенки капилляров и венул отечны, просветы перекрыты выбухающими отечными эндотелиоцитами с крупными гиперхромными ядрами, в цитоплазме которых много везикул и расширенных цистерн ретикулума (рис. 1 а, б). Около сосудов скопления коллагеновых фибрилл формируют капсуло-подобные образования. Расположение клеток эпидермиса в раневой зоне хаотичное, слои не выражены, истончены, базаль-ная мембрана прерывистая с очагами деструкции, кератиноциты разобщены, между ними встречаются лейкоциты. Начиная с 5-х сут в 3-й, 4-й группах и с 7-х сут в 1-й, 2-й группах эпителиоциты приобретают характерные черты, базальная мембрана в очагах повреждения восстанавливается, просматриваются десмосомы и полудесмосомы. В отличие от центральной зоны лоскутов, где дерма обычного строения, на границе с реци-пиентным ложем с 3-х по 5-е сут ее сосочковый слой не выражен, коллагеновые волокна дезориентированы, разной толщины, с плохо определяемой фибриллярностью, эластических волокон мало, в основном веществе преобладают несуль-фатированные гликозаминогликаны. Численная плотность фибробластов достоверно снижена (по сравнению с контролем) в лоскутах 1-й группы до 10-х сут, в лоскутах 2-й, 3-й, 4-й групп - до 7-х сут (табл. 2). При этом, по сравнениюс контролем, отмечается нарастание синтетической активности клеток, которая проявляется в накоплении ШИК-позитивных гликопротеидов в межклеточном веществе и увеличении удельной площади органелл синтеза. До 5-х сут в зоне входа сосудистой ножки лоскутов многочисленны юные фибробласты. Среди зрелых форм преобладают клетки 2-го типа [10], в цитоплазме которых аппарат синтеза с признаками гиперплазии. Местами расширенные отечные канальца рети-кулума образуют сферические вакуоли, на которых визуализируются рибосомы и свободные полисомы. Явления экзоцитоза и секреции коллагена более выражены в экспериментальных группах по сравнению с контролем. Пластинчатыйкомплекс выражен неодинаково во всех фибро-бластах, митохондрии крупные, часть из них с признаками отечности и плохо определяемым внутренним рельефом. Характерным признаком фибробластов 3-й, 4-й групп (в отличие от фи-бробластов 1-й, 2-й групп) является наличие в их цитоплазме крупных вакуолей с гомогенным содержимым средней электронной плотности, возможно, являющимися фагоцитированными каплями эплира. Такие же включения обнаруживаются в межклеточном веществе и в гистиоцитах (рис. 2 а, б). На периферии лоскутов, включая область формирующегося рубца и входа сосудистой ножки, клетки лейкоцитарно-ма-крофагального ряда образуют скопления. Средимакрофагов встречаются 2 субпопуляции - с преимущественно фагоцитарной функцией и соответствующей ультраструктурой, а также с преобладающей секреторной функцией и свойственной организацией [8, 10]. В количественном соотношении во всех группах преобладают макрофаги фагоцитарного типа. Характерной ультрамикроскопической картиной является тесное расположение фибробластов и макрофагов, вплоть до формирования простых, щелевидных и плотных контактов. В глубоких слоях дермы вокруг сосудов определяются тканевые базофилы: в 1-й, 2-й группах - преимущественно 2-го типа; в 3-й, 4-й группах преобладают клетки 3-го типа вплоть до 10-х сут [3, 8]. Численность желез кожи и волосяных фолликулов на границе лоскута с реципиентным ложем незначительно снижена во всех группах по сравнению с контролем.2..Пусковым механизмом интеграции лоскутов является прорастание сосудов через формирующийся рубец. В 1-й, 2-й группах этот процесс начинается с 7-х сут, интенсифицируясь к 14-м, а в 3-й, 4-й группах - с 5-х, нарастая к 10-м сут. Динамика роста удельной площади открытых сосудов в группах с применением эплира достоверно возрастает к 7-м сут (по сравнению с показателями 1-й и 2-й групп), а в 1-й и 2-й группах - к 14-м сут. Четко просматривается сеть сосудистых анастомозов, увеличивается численная плотность сосудов лоскута. В группах с применением эплира наблюдается выраженное уменьшение степени извитости, дилатации сосудов, их направление упорядоченно, параллельно ходу коллагеновых волокон. В тканях лоскута до 10-х сут сохраняются остаточные признаки воспаления, при этом усиливаются репаративные процессы, выраженные в увеличении численности и синтетической активности фибробластов и гистиоцитов. К 10-м сут во 2-й, 3-й, 4-й группах численная плотность фибробластов восстанавливается до контрольных значений (табл. 2). Процесс эпителизации ран в 3-й, 4-й группах сопровождался интенсивным восстановлением волосяного покрова.3.Завершающий этап интеграции лоскутов характеризуется восстановлением сосудистой и тканевой архитектоник, которое наблюдается к 30-м сут. При этом на начальном этапе данного периода (14-е сут) в сосудистом русле 1-й, 2-й групп отмечаются остаточные явления вазодила-тации осевых сосудов и их крупных ветвей. Сосуды проросли рубец, их направление упорядо-ченно. Численная плотность сосудов в лоскутах сопоставима со значениями контроля. Молодаясоединительная ткань рубца преобразуется в зрелую: в межклеточном веществе наблюдается равновесие между сульфатированными и несуль-фатированными гликозаминогликанами, численность фибробластов снижена относительно показателей контроля (табл. 2). В периферической области лоскутов 3-й, 4-й групп наблюдаются фиброциты и фиброкласты. Тканевые базофи-лы малочисленны, без признаков дегрануляции. В группах с применением эплира под обильным волосяным покровом отмечается отсутствие видимой границы между лоскутом и окружающей тканью, рубцы нормотрофичны.ОБСУЖДЕНИЕАдаптивно-интегративные реакции трансплантата регулируются посредством взаимодействия клеточных медиаторов его тканей и компонентами экстрацеллюлярного матрикса (ЭЦМ). В результате межклеточных и клеточно-матрикс-ных взаимодействий трансплантата развивается цепь связанных между собой реакций, включающих воспаление, коагуляцию, синтез и накопление компонентов ЭЦМ с последующим ремоделиро-ванием, неоваскуляризацию, контракцию, реэпи-телизацию, реиннервацию. Данные реакции есть суть раневого заживления, фазовое течение которого описано многими авторами и представлены рядом классификаций [9, 10]. Описанные тканевые изменения периодов приживления трансплантатов в данном эксперименте сопоставимы с данными, полученными А. Е. Белоусовым в пересаженных комплексах тканей у человека [1].Постоперационные осложнения в настоящем эксперименте инициированы острыми нарушениями гемодинамики в пересаженном комплексе тканей, максимальное количество которых наблюдалось со 2-х по 7-е сут, что соответствует данным других исследований [1, 2, 5, 12, 13]. По сравнению с 1-й, 2-й группами, в группах с применением эплира наблюдалось достоверно меньшее количество осложнений (табл. 1). Возможно, это обусловлено менее выраженными гемодинамическими изменениями в процессе адаптации лоскутов, а также более ранней и интенсивной интегративной реакцией, проявляющейся, в первую очередь, прорастанием сосудов из трансплантата в окружающие ткани (начиная с 5-7-х сут). Подобный эффект при воздействии эплира на процессы заживления операционной раны отмечался в работах по исследованию морфологии патологических кожных рубцов [4]. Этиявления, по всей видимости, обусловлены его ак- инициация которой обусловлена образовани-тивными компонентами (фосфолипидами, про- ем сосудистых связей с окружающими тканямистагландинами и др.,), положительное влияние и пролиферацией и синтетической активностьюкоторых на процессы регенерации описано в ли- основных клеточных элементов кожи. Примене-тературе. Также замечено, что в 3-й, 4-й группах ние эплира в ранний постоперационный периодотсутствовали признаки выраженного воспале- (с 1-х по 7-е сут) существенно улучшает процессния и реакции отторжения на шовный материал, приживления трансплантата, о чем свидетель-что подтверждает противовоспалительное дей- ствуют полученные клинические и морфоло-ствие пелоидов [6, 7].гические данные: более раннее и интенсивноепрорастание сосудов через границу лоскут -окружающие ткани, возрастание удельной пло-ЗАКЛЮЧЕНИЕщади отрытых сосудов и численной плотностисосудов, увеличение синтетической активности Таким образом, оптимальным периодом воз- и численности фибробластов, макрофагов и тка-действия на трансплантат является отрезок с 3-х невых базофилов, снижение частоты постопера-по 7-е сутки, что соответствует начальному пе- ционных осложнений и, как следствие, увеличе-риоду его адаптивно-интегративной реакции, ние процента приживаемости трансплантата.

Ключевые слова

трансплантация, кожный лоскут, адаптация и интеграция кожных трансплантатов, эплир, transplantation, skin fap, adaptation and integration of skin transplants, eplir

Авторы

ФИООрганизацияДополнительноE-mail
Малиновская Ирина СтаниславовнаГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития Россиираб. тел. (3822) 55-60-32, моб. тел. 8-906-954-48-98is_malinovskaya@mail.ru
Буркова В. Н.ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России
Баранова Е. Н.ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России
Селянинов К. В.ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России
Логвинов С. В.ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России
Ма линовский С. В.ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России
Всего: 6

Ссылки

Белоусов А. Е. Пластическая реконструктивная и эстетическая хирургия. - СПб.: Гиппократ, 1998. - 743 с.
Домников А. В. Микролимфогемоциркуляция васкуляризированных комплексов тканей в разные сроки после их трансплантации: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Новосибирск, 2000. - 20 с.
Лиднер Д. П., Коган Э. М. Тучные клетки как регуляторы тканевого гомеостаза и их место в ряду биологических регуляторов // Архив патологии. - 1996. - № 8. - С. 13.
Логвинов С. В., Арий Е. Г., Байтингер В. Ф. Патологические кожные рубцы. - Томск: Печатная мануфактура, 2004. - 140 с.
Малиновская И. С., Байтингер В. Ф., Семичев Е. В., и др. Ранние сосудисто-тканевые реакции в процессе приживления свободного и несвободного паховых лоскутов // Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. - 2009. - № 1 (28). - С. 22-26.
Потапова Г. В., Перевозчикова Т. В., Копылова Л. Ю., Мелик-Гайказян Е. В. Некоторые данные об иммунотроп-ных свойствах нового гепатопротектора эплира // Экспериментальная и клиническая иммунология: Сб. науч. трудов. - Томск, 1995. - С. 69-73.
Саратиков А. С., Буркова В. Н., Кураколова Е. А. Новые гепатопротективные и противовоспалительные препараты пелоидов. - Томск: Изд-во Том. гос. ун-та, 2004. - 385 с.
Серов В. В., Шехтер Ф. А. Соединительная ткань. - М.: Медицина, 1981. - 312 с.
Хрупкин В. И., Зубрицкий В. Ф., Ивашкин А. Н., и др. Дерматопластика раневых дефектов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 192 с.
Шехтер А. Б. Воспаление: Руководство для врачей / Под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. - М.: Медицина, 1995. - 640 с.
Finseth F., Cuting C. An experimental neurovascular island skin fap for the study of the delay phenomenon // J. Plast. Reconstr. Surg. - 1978. - Vol. 61, № 3. - P. 412-420.
Van der Sloot P. G., Seikaly H., Harris J. R. Efects of a Noncompressive Hematoma on Free Flap Viability // J. of Otolaryngology. - 2002. - Vol. 31, № 3. - P. 144-146.
Vidinsky B., Gal P., Toporcer T. et al. Histological study of the frst seven days of skin wound healing in rats. // J. Act. Vet. Brno. - 2006. - P. 19-202.
Zhang F., Sones W. D., Lineaweaver W. C. Microsurgical fap models in the rat. // J. Reconstr. Microsurg. - 2001. - Vol. 17, № 3. - P. 211-221.
 Особеннос тиадаптивно-интегративной реакции кожныхтрансплантатов под воздействием эплира | Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. 2011. № 3 (38).

Особеннос тиадаптивно-интегративной реакции кожныхтрансплантатов под воздействием эплира | Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. 2011. № 3 (38).