RA DIO-FREQUENCY ABLATION IN SOLITARY TUMOURS IN THE EXPERIMENT.pdf ВВЕДЕНИЕ ственным органом, пораженным метастазами, и в таком случае пациенты могут быть кандидатами До 30% больных с раком толстой кишки на на хирургическое лечение [6] момент постановки диагноза имеют метастати-Возможность выполнения радикальных опеческое поражение, и в первую очередь - в пече-раций у пациентов с первичными и метастатичени. Более того, от 30% до 55% пациентов, полу-скими опухолями печени до настоящего времени чивших потенциально радикальное лечение по не превышает 10% [10, 14]. При этом среди приповоду рака толстой кишки, имеют риск прогрес-чин низкой резектабельности не последнее место сирования заболевания в виде метастазирования занимает необходимость значительного расшив печень. В 25% случаев печень является един-рения объема операции, особенно при наличии Вопросы реконструктивной и пластической хирургии №1(48) март’2014 50 Кошель А.П., Зуева Е.П., Клоков С.С., .Толстых А.С, Мартынюк А.К., Азанов А.З. двух и более очагов, что при сомнительной радикальности вмешательства сопряжено со значительным увеличением степени операционного риска у ослабленных онкологических больных. До настоящего времени единственным способом увеличения продолжительности жизни больных с метастатическим поражением остается хирургическое вмешательство в том или ином объеме. В последние годы арсенал средств воздействия на метастатический очаг расширился, и в первую очередь за счет радиочастотной термоаблации, криодеструкции, лазерной деструкции, электрохимического лизиса и т.д. [4]. При этом уровень 5-летней выживаемости у пациентов, которым был проведено удаление (разрушение) метастатических очагов в печени, составляет в среднем 25%, однако в группах с хорошим прогнозом может достигать 35%-58% [15]. Однакооперабельность при метастатических поражениях печени, по данным разных авторов, не превышает 10-15%. Более того, значительное число пациентов имеют противопоказания к резекции печени. Так, не показана резекция печени при множественных билобарных поражениях, когда остается не более 30% органа, при вовлечении магистральных сосудов ворот и внепеченочном распространении процесса. Наконец, противопоказанием к операции является выраженная сопутствующая патология [5, 13, 15]. В настоящее время все большую распространенность получают методы локальной деструкции опухолевых очагов в печени, несмотря на сравнительно короткую историю клинического применения. Точкой приложения их в онкологии являются пациенты с первичным и вторичным поражением печени, почек, лёгких и костей [18]. Все известные на сегодня методы локальной деструкции можно разделить на химические и физические. К химическим относят алкоголизацию очагов, введение в опухоль гипертонического раствора или цитостатиков. К физическим методам относят холодовую и тепловую деструкции [22]. К методикам тепловой деструкции относят: а) электродиатермическую; б) микроволновую (коагуляционный некроз, вследствие учащения колебания молекул в опухолевом очаге); в) высокоинтенсивный сфокусированный ультразвук (вызывает коллапс капилляров); г) интерстициальную лазерную фотокоагуляцию - Nd:YAG-лазером; д) радиочастотную аблацию (РЧА). Метод радиочастотной термоаблации (РЧТА), теплового разрушения тканей (от латинского ablation - удаление, разрушение действием), является одним из перспективных и малоинвазивных [2, 17, 20]. Его можно использовать как самостоятельно, так и в комбинации с другими деструктивными, лекарственными и традиционными хирургическими методами лечения опухолевых поражений печени [9, 11, 12]. В хирургию печени РЧА пришла в начале 1990-х гг., будучи впервые примененной J. McGahan и соавт. [21]. Основное ее назначение - чрескожная, лапароскопическая или «открытая » термодеструкции опухолей. В России использование метода РЧА даже с целью деструкции только начинается, и не существует еще сложившегося взгляда на возможности данной методики [8]. Цель настоящего исследования - изучение результатов воздействия радиочастотных токов с различным временем экспозиции в эксперименте на мышах с карциномой легких Льюис. Задачи исследования: 1) изучить влияние радиочастотных токов на рост первичной опухоли и метастазирование карциномы легких Льюис у мышей в зависимости от способа деструкции; 2) изучить морфологические особенности первичной опухоли карциномы легких Льюис у мышей и метастатических очагов после различных вариантов деструкции. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ В качестве объекта эксперимента были взяты 45 половозрелых мышей-самок линии С57ВL/6 массой 19-21 г, конвенциональных, 1-й категории, полученных из отдела экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии СО РАМН (г. Томск). Экспериментальная модель - карцинома легких Льюис (3LL). Опухоль возникла спонтанно как карцинома легких мышей линии С57ВL/6 в 1951 г. [19]. Перевиваетсяна 12-14 сут роста, средняя продолжительность жизни животных - 24 дня [7]. Метастазирует гематогенно в легкие практически в 100% случаев. В эксперименте использована перевивка 5-6.106 опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора под кожу спины. Содержание животных осуществлялось в соответствии с Правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [16]. Экспериментальные исследования проведены в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003г. «Об утверждении правил лабораторной практики », Федеральном законом «О лекарственных средствах» (ст. 36), «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005). №1(48) март’2014 Вопросы реконструктивной и пластической хирургии Новые технологии 51 После выдерживания животных в карантине в течение 10 дней с целью адаптации к условиям вивария мыши были взвешены и равномерно распределены на группы. Карцинома легких перевита подкожно по 5-6.106 клеток в 0,1 мл физиологического раствора [7]. На 10-е сут после перевивки опухоли животные равномерно были распределены в группы и в этот же день проведено воздействие радиочастотными токами. Всего было сформировано три группы: 1. Контроль - животные с опухолями без воздействий (n = 15); 2. Группа 1 - одномоментное, однократное воздействие двумя электродами на 10-е сут развития опухоли (n = 15); 3. Группа 2 - одномоментное, однократное воздействие четырьмя электродами на 10-е сут развития опухоли (n = 15); Общая продолжительность эксперимента составила 21 сут. Радиочастотную термоаблацию проводили с применением опытного образца «Деструктор онкологический» (ДО-01). Аппарат состоит из генератора (мощность - 80 Вт, частота колебаний - 440 кГц) и дополнительных опций (контроль импеданса и контроль температуры), а также перистальтирующего насоса, подающего охлаждающую жидкость (стерильный физраствор) и набора охлаждаемых электродов длиной 15 см с рабочей частью 1 см. Контроль температуры в зоне воздействия осуществляли с помощью термодатчика. Время работы определялось автоматически по достижении заданного импеданса в 350 Ом. После обработки операционного поля рабочие электроды вводили в опухоль на всю длину его рабочей части, отступая от края опухоли на 3-5 мм. В группе 1 воздействие радиочастотными токами проводилось однократно с помощью двух электродов (рис. 1, а). В группе 2 однократное воздействие на опухоль осуществляли с помощью четырех электродов одновременно (рис. 1, б). Воздействие проводилось мощностью 2 Вт при сопротивлении 350 Ом. В ходе манипуляции контролировалась температура тканей, которая составляла 80-100°С. Эффективность лечебных воздействий оценивали на 21-е сут опыта, измеряя массу новообразования и подсчитывая процент торможения роста опухоли (ТРО) по фор AB . муле: ТРО ..100%, где А - средняя масса A опухоли в контрольной группе; В - средняя масса опухоли в опытной группе. Для определения интенсивности процесса метастазирования использовано несколько показателей: количество метастазов в легких (длякаждого животного в группе и среднее значение); площадь метастатического поражения, которую рассчитывают по формуле .r2 определяя при этом диаметр метастазов. Частоту метастазирования опухоли вычисляли в процентах по отношению числа животных с метастазами к общему количеству мышей в группе. Индекс ингибирования метастазирования (ИИМ), который позволяет оценить степень метастатического поражения, рассчитывали АВ . . . ... АВ . по формуле [1] ИИМ . kk .100%, АВ k. k где Ак и А - частота метастазирования в лёгкие у мышей контрольной и опытной групп; Вк и В - среднее число метастазов в лёгких в контрольной и опытной группах соответствено В случае значительного поражения легочной ткани, когда регистрировалось большое количество метастатических узлов, оценивали степень метастатического поражения по шкале (D. Tarin, J.E. Price, 1979), позволяющей дифференцировать тяжесть поражения в зависимости от количества метастазов и их размеров. Выделяли низкую (LCP - low colonization potential: 1-ю степень - 30 узлов, отсутствуют сливные узлы; 4-я степень 100 узлов) степень поражения легких (табл. 1). По окончании экспериментов мышей умерщвляли, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных », утвержденные Министерством здравоохранения РФ. Обработка полученных результатов проведена с использованием непараметрических критериев Вилкоксона-Манна-Уитни (U) и углового преобразования Фишера . [3]. ба Рис. 1. Схема расположения электродов по отношению к опухоли в группах 1(а) и 2(б) (описание в тексте) Вопросы реконструктивной и пластической хирургии №1(48) март’2014 52 Кошель А.П., Зуева Е.П., Клоков С.С., .Толстых А.С, Мартынюк А.К., Азанов А.З. Таблица 1 Степень метастатического поражения легких в зависимости от количества и размера метастазов (Tarin D., Price J.E., 1979) Степень поражения Количество метастазов и их диаметр 0 Метастазы отсутствуют LCP-1 Меньше 10 шт. с диаметром, не превышающим 1 мм LCP-2 От 10 до 30 шт., причем некоторые из них размерами больше 1мм HCP-3 Больше 30 шт. разного размера, однако нет сливных HCP-4 Тяжелое поражение легочной ткани, менее 100 шт. HCP-5 Массивное поражение легочной ткани, более 100 шт., наличие сплошных опухолевых узлов РЕЗУЛЬТАТЫ У мышей контрольной группы (без воздействий) объём опухоли закономерно повышалсяна протяжении всего эксперимента. В группе 1 (основной) обнаружена тенденция к уменьшению массы опухолевого узла в 1,5 раза по сравнению с контролем. Процент торможения роста опухоли составил 33%. Частота метастазирования, количество и площадь метастазов в данной группе достоверно не отличались от таковых в контроле, при этом 37,5% мышей имели более высокую (третью) степень поражения, тогда как в контроле этот показатель составил 8,3% (табл. 2, 3). В группе 2 применение деструктора вызвало достоверное торможение опухолевого роста (65%), а масса опухоли уменьшилась в 2,9 раза. Кроме того, в данной группе отмечалось снижение количества метастазов в легких - в 1,6 раза по сравнению с аналогичными значениями в контроле. В 2,6 раза уменьшилась площадь метастазов. Все животные имели лёгкую (первую и вторую) степень метастатического поражения, индекс ингибирования метастазирования составил 38% (табл. 2, 3). Объём опухоли у животных в обеих основных группах на 7-е сут имел выраженную тенденцию к уменьшению. При этом наиболее существенно он уменьшился в группе 2, в которой отмечались лишь некротические участки на месте расположения опухоли. Несмотря на то, что на 21-е сут после трансплантации опухоли её объём в обеих экспериментальных группах вновь стал увеличиваться, он всё ещё статистически значимо отличался от контроля (рис. 2). В группе 2 применение деструктора вызвало достоверное торможение опухолевого роста (65%), а масса опухоли уменьшилась в 2,9 раза. Кроме того, в данной группе отмечалось снижение количества метастазов в легких - в 1,6 раза по сравнению с аналогичными значениями в контроле. В 2,6 раза уменьшилась площадь метастазов. Все животные имели лёгкую (первую и вторую) степень метастатического поражения, индекс ингибирования метастазирования составил 38% (табл. 2, 3). Объём опухоли у животных в обеих основных группах на 7-е сут имел выраженную тенденцию к уменьшению. При этом наиболее существенно он уменьшился в группе 2, в которой отмечались лишь некротические участки на месте расположения опухоли. Несмотря на то, что на 21-е сут после трансплантации опухоли её объём в обеих экспериментальных группах вновь стал увеличиваться, он всё ещё статистически значимо отличался от контроля (рис. 2). Таблица 2 Влияние радиочастотных токов на развитие карциномы легких Льюис в основной и контрольной группах Группа наблюдения, количество введений (число мышей) Контроль (n=15) Деструкция, режим № 1 (n=15) Деструкция, режим № 2 (n=15) Масса опухоли (Х±m), (г) 2,36±0,35 1,57±0,25 0,82±0,13* Торможение роста опухоли (%) - 33 65 Частота метастазирования, (%) 100 100 100 Количество метастазов на 1 мышь (Х±m) 22,58±3,55 24,38±2,96 14,00±2,62** Площадь метастазов ИИМ, на 1 мышь (Х±m), (мм2) (%) 17,99±5,46 - 21,61±7,74 -8 7,02±1,99 38 Примечание: *p

Скачать электронную версию публикации