THYROID TISSUE AUTOTRANSPLANTATION IN CELL THERAPYAS AN OPTION OF POSTOPERATIVE HYPOTHYROIDISM PREVENTION.pdf ВведениеПо данным многих авторов, зафиксирован зна-чительный рост тиреоидной патологии, консерва-тивная коррекция которой не всегда эффективна[6, 9, 10, 22]. Хирургическое лечение тиреопатий,являясь радикальным методом, влечет за собойпроблему развития послеоперационного гипо-тиреоза [1, 3, 4, 10, 22, 23]. Постоянная замести-тельная гормональная терапия, затруднительныйи долгий подбор дозировок, а в некоторых случаяхнепереносимость тиреоидных препаратов дела-ют аутотрансплантацию неповрежденной тканищитовидной железы в условиях тиреоидэктомиивозможным вариантом профилактики развитиягипотиреоза [2, 5, 8, 17-19, 26, 27, 31, 37, 38, 40,41]. Выбор большого сальника, обладающеговысокой степенью васкуляризации, иммунопро-тективности и способностью к лимфатрофике ивариант аутотрансплантации, минимизирующийразвитие иммунного конфликта, могут считатьсявполне обоснованными [7, 8, 17-19, 32-34, 35].40№ 4 (39) декабрь2011 Вопросы реконструктивной и пластической хирургииГалян А. Н., Попов О. С., Лян Н. И., Ларионов М. М., Тихонов В. И., и др.Полученные в последнее время данные о свой-ствах и закономерностях жизнедеятельностистволовых клеток, культивируемых по современ-ным технологиям [7, 11-16, 20, 21, 24, 25, 28, 29,30, 36, 37], открыли возможность их примененияв комплексном лечении тиреоидной патологии,что позволило нам применить аутологичные по-липотентные мезенхимальные стромальные клет-ки (АПМСК) для улучшения жизнедеятельноститиреоидного аутотрансплантата. [8, 18, 19].Целью исследования явилось изучение мор-фофункционального состояния ткани щитовид-ной железы, аутотрансплантированной в прядьбольшого сальника с использованием аутологич-ных полипотентных мезенхимальных стромаль-ных клеток (АПМСК).Задачи:В эксперименте изучить возможность ау-тотрансплантации ткани щитовидной железыв большой сальник.Изучить влияние АПМСК на морфофункци-ональное состояние аутотрансплантата щито-видной железы в большом сальнике и провестисравнительную оценку вариантов аутотрансплан-тации ткани щитовидной железы в условиях при-менения клеточной терапии и без нее.МетодыЭксперименты проведены на 150 шести-месячных крысах - самцах породы «Wistar»массой 300-350 г из питомника отдела экспери-ментального биомедицинского моделированияНИИ фармакологии СО РАМН (сертификатимеется), которым под эфирным масочным нар-козом выполнены тиреоидэктомия и трансплан-тация ткани щитовидной железы (ЩЖ) в прядьбольшого сальника в виде доли или ее гомогени-зата (рис. 1-3).Экспериментальные животные содержа-лись в соответствии с Правилами Европейскойконвенции по защите позвоночных животных.Тиреоидэктомиювыполняли по общепринятойметодике, щитовидные артерии по отдельностине перевязывались, кровотечение останавлива-лось посредством применения гемостатическойгубки, общая кровопотеря составляла около1-2 мл. Рану на шее ушивали наглухо. Удаленныедоли щитовидной железы помещали в физиоло-гический раствор 0,9 % NaCl. Срединнымразре-зом в мезогастрии вскрывали брюшная полость,в рану выводили прядь большого сальника. Неиз-мененную долю удаленной щитовидной железыфиксировали к сальнику узловым швом и произ-водили одноразово инъекцию АПМСК в коли-честве 500 000 штук непосредственно в транс-плантируемую долю щитовидной железы, далееаутотрансплантат окутывали прядью большогосальника и подшивали париетальной брюшинепередней брюшной стенки, после чего брюшнаяполость ушивалась послойно. В случае трансплан-тации гомогенизата удаленной неизменненойдоли щитовидной железы предварительно из нееготовили гомогенизат и формировали в сальни-ке резервуар при помощи кисетного шва, в неготрансплантировали г Рис. 1. Аутотрансплантация доли щитовидной же- омогенизат неизмененнойлезы в прядь большого сальникаРис. 2. Введение АПМСК в аутотрансплантат долищитовидной железыРис. 3. Введение АПМСК в резервуар сальникас гомогенизатом доли щитовидной железы41Вопросы реконструктивной и пластической хирургии № 4 (39) декабрь2011Экспериментальная хирургияудаленной доли щитовидной железы и вводилиАПМСК в количестве 500 000 штук. Кисет за-тягивали и фиксировали резервуар к брюшинепередней брюшной стенки с последующим по-слойным ее ушиванием. Животные были разде-лены на группы: I гр. - с трансплантацией долиЩЖ; II гр. - с трансплантацией тканевого го-могенизата доли ЩЖ; III гр. - с трансплантаци-ей доли ЩЖ и введением в трансплантат 500 000АПМСК; IV гр. - с трансплантацией тканево-го гомогенизата доли ЩЖ и введением в транс-плантат 500 000 АПМСК. Контрольную группусоставили 20 интактных крыс.АПМСК готовили по следующей методике.Получали суспензию костномозговых клетокв 1 мл препаровочной среды, содержащей 95 %RPMI-1640 и 5 % ЭТС. После фильтрации че-рез капроновый фильтр и отмывания клетокпутем центрифугирования при 1500 об/минв течение 10 минут взвесь клеточных элементовв 5 мл препаровочной среды помещали в чаш-ке Петрив СО2-инкубатор с 5 % СО2 при 37 °Сна 90 мин. Адгезирующие элементы отделялис помощью 0,25 % раствора трипсина и 0,02 %раствора ЭДТА в соотношении 1:1 в течение15 минут при тех же условиях. После двукрат-ного отмывания клетки разводили до необходи-мой концентрации и вводили в трансплантат по500 000 клеток в 0,2 мл препаровочной среды.Функциональное состояния трансплантирован-ной ткани ЩЖ оценивали через 1 и 3 мес. послеоперации. Крыс под наркозом забивали методомдислокации шейных позвонков, полученные приэтом 5-7 мл крови центрифугировали и отби-рали 3-4 мл сыворотки по стандартной методи-ке, далее выполняли лапаротомию и извлекалитрансплантат. Исследование уровней ТТГ, Т4,Т3, Т4 св., Т3 св., тиреоглобулина и тиреокаль-цитонина проводили при помощи наборов дляиммуноферментного анализа «ТироидИФА-ТТГ-1», «ТироидИФА-тироксин-01», «Тиро-идИФА-свободный Т4» фирмы «АлкорБио»(г. Санкт-Петербург), «СвТ3-ИФА» фирмы«Хема» (г. Москва), «НВО Иммунотех» (г. Мо-сква) и DRG International Inc. Lot 6032-CT(USA) и DRG Instruments GmbH (Germany).Для морфологического исследования трансплан-тат фиксировали в 10 % растворе формалина,стандартным методом готовили парафиновыесрезы (через весь трансплантат) толщиной 5 мкми окрашивали гематоксилином и эозином. Мор-фометрическое исследование проводили путемопределения площади фолликулов и содержаще-гося в них коллоида (увеличение 160х).Количественные показатели выражались в видеM±m, где M - среднее значение, m -стандартнаяошибка среднего. Внутри- и межгрупповые разли-чия показателей оценивались с помощью непара-метрического U-критерия Манна-Уитни. Различиясчитали статистически значимыми при p

Скачать электронную версию публикации