Polymorphism of genes of serotonin exchangeat Russian patients with neurotic, stress-related disorders from Western Siberia.pdf В последние годы ведется активный поиск структурных вариантов генов, приводящих к различным патологиям у человека. Вклад полиморфизмов генов, участвующих в развитии различных заболеваний в разных популяциях и на разных территориях, несомненно, разнообразен. На русской популяции Западно-Сибирского региона изучены многочисленные полиморфизмы генов, в том числе полиморфизм гена эндо-телиальной NO-синтазы (eNOS) [1], гена нейрональной синтазы оксида азота (NOS1), эндотелиальной синтазы оксида азота (NOS3) [2], фактора некроза опухоли (TNFa) [3-4], гена-онкосупрессора р53, генов цитохро-мов Р-450 (CYP2C19 и CYP2E1), генов глутатион-S-трансфераз (GSTT1, GSTM1 и GSTP1) [5-7], генов деиодиназ (DI01 и DI02) [8], гена аполипротеина Е (АроЕ) [9-10], генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, IL4, IL4RA, IL12B, VDR), гена интер-лейкина-10 НЛО [11], гена холодового рецептора TRPM8 [12], генов тяжелой цепи (3-миозина (MYH7), миозинсвязывающего белка С (MYBPC3), (33-субъеди-ницы G-белка (GNB3) и GATA-связывающего белка 4 (GATA4) [13], гена рака молочной железы (BRCA1) [14], гена Pi-адренорецептора (A145G), гена транскрипционного фактора (SP4), гена метилентетрагидро-фолатредуктазы (MTHFR), гена хемокиновых рецепторов (CCR5), ангиотензинконвертирущего фермента (АСЕ) [15], фактора Лейдена (FV), протромбина (F11), белка GPllla (GPllla) [16] и других у здоровых лиц и больных сердечно-сосудистыми заболеваниями, инсу-линзависимым сахарным диабетом, различными формами рака (рак молочной железы, рак легкого, рак органов головы и шеи), бронхиальной астмой и туберкулезом, желчно-каменной болезнью, хронической об-структивной болезнью легких, разными формами ато-пического дерматита, рассеянным склерозом, ревматоидным артритом, хроническим вирусным гепатитом, герпетической инфекцией, аутоиммунным тиреоиди-том и другими заболеваниями.При алкогольной и наркотической зависимостях изучены полиморфизмы генов алкогольдегидрогеназ ADH 1-го класса (ADH1B и ADH1C) [17], гена дофа-мин-р-гидроксилазы DBH*444g/a [18] и гена эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) [1]. При эндогенных психических расстройствах у европеоидов исследованы полиморфизмы генов серотонинового и дофаминового обменов [19-22], ангеотензинпревращающего фермента (АСЕ), гена медиатора H-RAS (HARLEY-RAS1) [23] и гена катехол-О-метилтрансферазы (КОМТ) [24]. Ис-следования полиморфных вариантов генов серотонинового обмена при невротических психических расстройствах немногочисленны.Согласно современным представлениям, система нейронов, использующих в качестве медиатора норад-реналин, связана с побуждающими, мотивационными аспектами поведения, дофаминовая система - с обеспечением подкрепления, или «награды», а серотонино-вая оказывает тормозящий эффект на определенные виды активации, в частности ведущие к тревоге или агрессии. Такая «функциональная» классификация ме-диаторных систем является условной, т.к. все три ме-диаторные системы тесно взаимодействуют между собой и участвуют в регуляции настроения, познавания, обучения, моторной активности, бодрствования, подкрепления, сна и аппетита [25].Серотонинергические синаптические образования контролируют формирование двигательных актов, систем положительного подкрепления, играют заметную роль в пищевом, половом, исследовательском поведении, участвуют в формировании аффективных компонентов поведенческих актов, самообладании и эмоциональной устойчивости, определяют становление и поддержание суточных и циркадианных ритмов физиологических процессов, осуществляют температурную регуляцию организма [26, 27]. Повышение серотони-нергической активности создает в коре головного мозга ощущение подъема настроения; недостаток серотонина, напротив, вызывает снижение настроения и депрессию. Серотонин является основным химическим ме-диаторным соединением, контролирующим агрессивное поведение и выраженность тревожных проявлений на фоне меняющихся условий внешней среды [28, 29]. Серотониновые рецепторы типа 2А (5-HTR2A), регулирующие уровень 5-НТ в мозге, в значительных количествах содержатся в структурах, связанных с эмоциональными и когнитивными процессами, - в гиппокампе и передней коре мозга [30, 31]. В гене 5-HTR2A, расположенном на 13-й хромосоме, описано несколько полиморфных локусов. Локус Т102С обусловлен заменой тимина на цитозин во втором интроне участка 13q 14-21 и представлен двумя аллельными вариантами: А1 и А2. Второй полиморфный локус A-1438-G гена 5-HTR2A находится в неравновесном генетическом сцеплении с локусом Т102С и расположен в зоне промотора гена, т.е. может иметь функциональное значение. Уровень серотонина в мозге в значительной мере регулируется активностью его транспорта, ответственным за кото-198рый является ген-переносчик (транспортер) серотонина (5-HTT), расположенный в семнадцатой хромосоме в области q11.1-q12. Изучение структуры гена перенос-чика серотонина обнаружило два полиморфных локуса, локус VNTR-17 обусловлен изменением числа тандем-ных повторов во втором интроне с двумя типичными (12 и 10 единиц повтора) и одним редким (9 единиц повто-ра) аллелями, второй полиморфизм 5-HTTLPR - инсер-ционно-делеционный, включает повторяющиеся после-довательности длиной 22 п.н. в районе промотора гена и представлен двумя аллельными вариантами: L (длин-ный) и S (короткий - с делецией). Последний полимор-физм является функциональным: присутствие длинного аллеля обеспечивает более высокий уровень экспрессии гена и большую интенсивность метаболизма серотонина по сравнению с коротким аллелем [32], наличие корот-кого аллеля локуса 5-HTTLPR связано со снижением обратного захвата серотонина, что увеличивает длитель-ность серотонинергической активности [33, 34].Целью настоящей работы явилось изучение поли-морфизма генов серотонинового обмена у лиц с невро-тическими психическими расстройствами.Материал и методыИсследование проводили в группе психически здо-ровых лиц (85 человек, из них 68 женщин и 17 мужчин, средний возраст 38,8±13,8 лет), группе больных с рас-стройствами адаптации с преобладанием депрессивных реакций - F43.20, F43.21, F43.22, МКБ-10 (69 пациен-тов, из них 60 женщин и 9 мужчин, средний возраст 43,27±11,7 года) и пациентов с диссоциативными (кон-версионными) расстройствами - F44, МКБ-10 (104 па-циента, из которых 93 женщины и 11 мужчин, средний возраст 40,33±14,06 года). Все обследованные считали себя этнически русскими и не состояли в кровно-родственных браках.Генетические исследования и создание банка ДНК проводились согласно этическим принципам медицин-ской генетики (протокол № 6 заседания Комитета по Биомедицинской этике ГУ НИИ ПЗ ТНЦ СО РАМН от 12.10.2005 г.). Исследование выполнено на базе лабо-ратории клеточных и молекулярно-биологических ис-следований и отделения пограничных состояний кли-ник ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН, лаборатории клинической генетики ГУ НЦ психиче-ского здоровья РАМН. В группе психически здоровых лиц и лиц с невротическими психическими расстрой-ствами кровь для биологических исследований брали из локтевой вены. Выделение ДНК из венозной крови проводили стандартным методом с использованием протеиназы К и фенол-хлороформа [35]. Высокомоле-кулярную ДНК высушивали при комнатной температу-ре и растворяли в ТЕ буфере, в таком виде ДНК храни-ли при -20ºС. Для определения аллельного полимор-физма в локусе Т102С гена 5-HTR2A проводили поли-меразную цепную реакцию (ПЦР) с помощью прайме-ров 5'-TCTGCTACAAGTTCTGGCTT-3' и 5'-CTGCAG CTTTTTCTCTAGGG-3', для анализа полиморфизма A-1438-G гена 5-HTR2A в реакционную смесь вносили праймеры с последовательностью нуклеотидов: 5'-AAGCTGCAAGGTAGCAACAGC-3' и 5'-AACCAACTTATTTCCTACCAC-3'. Для выявления рестрикцион-ного полиморфизма реакционную смесь обрабатывалиферментом Msp1 в течение 12 ч при 37°С с последую-щим разделением полученных фрагментов в 3%-номагарозном геле, окрашенном бромистым этидием. Дляопределения полиморфизма в локусе VNTR-17 гена5-HTT проводили ПЦР с использованием олигонуклео-тидных праймеров 5'-GTCAGTATCACAGGCTGCGAG-3'и 5'-TGTTCCTAGTCTTACGCCAGTG-3', полиморфизм влокусе 5'-HTTLPR гена 5-HTT выявляли с помощью прай-меров 5'-GGCGTTGCCGCTCGTA ATGC-3' и5'-GAGGGACTGAGCTGGACAACC-3'.ПолученныеVNTR-17 и 5'-HTTLPR ПЦР-фрагменты разделяли в 5%-ном полиакриламидном геле. Фрагменты визуализировали и идентифицировали в УФ свете при длине волны 495 нм.Статистическую обработку результатов производи-ли с помощью программ Microsoft Excel и GraphPad Prism, версия 5,0. C помощью критерия Колмогорова-Смирнова оценивали отличия распределения генераль-ной совокупности от нормального. Для проверки соот-ветствия эмпирического распределения частот геноти-пов теоретически ожидаемому равновесному распреде-лению Харди-Вейнберга использовался модифициро-ванный критерий χ² Пирсона (р), определяемый с по-мощью программы GraphPad Prism, версия 5,0. При попарном сравнении частот аллелей и генотипов в группах психически здоровых лиц и лиц с психической дезадаптацией применяли критерий χ² (р) с поправкой Йетса для небольших выборок. Различия считали дос-товерными при уровне значимости p

Скачать электронную версию публикации