Calcium-dependent changes in the activity of antioxidant enzymes and heat resistance of wheat seedlings under the influe.pdf Введение Полиамины относят к стрессовым метаболитам растений [1]. В обычных условиях они содержатся в растительных тканях в концентрациях, близких Ю.Е. Колупаее, А.И. Кокорев, М.А. Шклярееский 106 к фитогормональным, - 10-9-10-5 М [2]. Однако при действии стрессоров различной природы их количество может увеличиваться в несколько раз и даже на порядок [1, 3, 4]. Считается, что увеличение содержания полиаминов является не столько отображением вызываемой стресс-факторами активации катаболического потока, сколько важной стресс-протекторной реакцией растений [5, 6]. Достаточно давно показана обусловленная катионным состоянием полиаминов способность оказывать стабилизирующее действие на отрицательно заряженные макромолекулы белков, нуклеиновых кислот, а также на мембранные структуры [2]. Позднее было установлено, что полиамины могут вовлекаться в сложные сигнальные процессы в растительных клетках. Такие эффекты отчасти могут быть обусловлены образованием активных форм кислорода (АФК) и оксида азота при метаболизме полиаминов [7]. С другой стороны, полиамины могут влиять на редокс-гомеостаз путем связывания свободных радикалов [8] и участия в регуляции экспрессии генов антиоксидантных ферментов [7, 9]. Отдельной составляющей физиологической активности полиаминов может быть их влияние на состояние ионных каналов. Феноменология таких эффектов зарегистрирована достаточно давно [10]. Согласно современным моделям, полиамины оказывают сложное и неоднозначное влияние на ионные каналы различных типов. Так, есть сведения об их способности ингибировать калиевые и неспецифические потенциалнезависимые катионные каналы [11]. С другой стороны, показано, что путресцин способен вызывать повышение концентрации цитозольного кальция в растительных клетках [12]. По крайней мере отчасти такой эффект может быть связан с усилением образования АФК при деградации путресцина диаминоксидазой и как следствие открыванием чувствительных к действию пероксида водорода и гидроксильного радикала неселективных кальциевых каналов [11]. Известно, что между АФК и ионами кальция как сигнальными посредниками существуют сложные связи [13]. С одной стороны, состояние кальциевых каналов (как потенциалзависимых, так и механочувствительных) зависит от содержания АФК [14-16]. С другой - АФК-генерирующие ферменты, прежде всего НАДФН-оксидаза, могут активироваться кальцием [17, 18]. Однако функциональное взаимодействие между АФК и ионами кальция при реализации эффектов полиаминов на растительные клетки изучено пока очень слабо. Тем более остается открытым вопрос о роли таких взаимодействий в реализации стресс-протекторных эффектов полиаминов. Экзогенные полиамины, в том числе диамин путресцин, обладают способностью повышать устойчивость растений к абиотическим стрессорам различной природы [7, 19], в частности, к гипертермии [20]. Ранее нами показано участие АФК в проявлении стресс-протекторного действия пу-тресцина на проростки пшеницы при повреждающем нагреве [21]. Данные ингибиторного анализа указывали на участие как НАДФН-оксидазы, так и диаминоксидазы в формировании сигнального пула пероксида водорода Кальцийзависимое изменение активности антиоксидантных ферментов jq^ в корнях проростков пшеницы. Однако неисследованной оставалась роль кальция как в образовании АФК при действии путресцина, так и в активации защитных реакций, в частности, компонентов антиоксидантной системы. В связи с этим целью работы явилось исследование ингибиторными методами участия различных пулов кальция в регуляции образования пероксида водорода, активности антиоксидантных ферментов и индуцировании путресцином теплоустойчивости проростков пшеницы. Материалы и методики исследования Объект исследования - этиолированные проростки мягкой озимой пшеницы (Triticum aestivum L.) сорта Досконала, полученные из коллекции Института растениеводства им. В.Я. Юрьева НААН Украины, репродукция 2019 г. Зерновки поверхностно обеззараживали в течение 3Q мин в 6% растворе H2O2 и проращивали при температуре 2Q-22 °С на воде, очищенной с использованием системы водоподготовки, включающей в себя фильтр механической очистки, угольный фильтр и полупроницаемую обратноосмотическую мембрану с размером ячеек 1 нм. На третьи сутки проращивания семян в среду добавляли путресцин в концентрации 1 мМ и выдерживали проростки на его растворе в течение одних суток, проростки контрольного варианта продолжали инкубировать на очищенной водопроводной воде. Концентрация путресцина, индуцирующая максимальное развитие теплоустойчивости проростков, установлена ранее [21]. В отдельных вариантах опыта проростки в течение 26 ч обрабатывали антагонистами кальция - 5QQ мкМ ЭГТА (хелатор внеклеточного Ca2+) и 2QQ мкМ неомицином - ингибитором зависимого от фосфолипазы C поступления кальция в цитозоль из внутриклеточных компартментов. В вариантах по изучению комбинированного действия путресцина и антагонистов кальция последние вносили в среду инкубации проростков за 2 ч до добавления в нее путресцина. Концентрации антагонистов Ca2+, существенно модифицирующие эффекты экзогенного путресци-на, но не вызывающие заметных токсических эффектов, выбирали в предварительных опытах. Все биохимические показатели определяли в корнях проростков, поскольку они более чувствительны к воздействиям экзогенных соединений и нагрева [22]. Содержание пероксида водорода в корнях определяли через 2 ч после начала их обработки путресцином [21] либо через 4 ч от начала обработки антагонистами Ca2+. Количество H2O2 анализировали с помощью ферротиоцианатного метода, экстрагируя пероксид водорода из растительного материала на льду 5% трихлоруксусной кислотой [23]. Активность антиоксидантных ферментов определяли через 4 и 24 ч после начала инкубации проростков на растворе путресцина, а также через 5 ч после повреждающего прогрева проростков (1Q мин при 45 °C). В вариантах с изучением эффектов кальциевых антагонистов время инкубации корней в Ю.Е. Колупаее, А.И. Кокорев, М.А. Шклярееский 108 их растворах, а также в растворах путресцина и его комбинаций с ЭГТА или неомицином составляло 24-26 ч. При определении активности антиоксидантных ферментов навески корней гомогенизировали на холоде в 0,15 М K, Na-фосфатном буфере (pH 7,6), содержавшем ЭДТА (0,1 мМ) и дитиотрейтол (1 мМ) [24]. Для анализа использовали супернатант после центрифугирования гомогената при 8000 g в течение 10 мин при 4 °С на центрифуге MPW 350R («MPW MedInstruments», Польша). Активность цитозольной супероксид-дисмутазы (СОД, КФ 1.15.1.1) определяли при pH 7,6, используя метод, в основе которого способность фермента конкурировать с нитросиним те-тразолием за супероксидные анионы, образующиеся вследствие аэробного взаимодействия НАДH и феназинметосульфата; оптическую плотность определяли при 540 нм на спектрофотометре СФ-46 («ЛОМО», Россия). Активность каталазы (КФ 1.11.1.6) анализировали при рН 7,0 по количеству пероксида водорода, разложившегося за единицу времени. Активность гваяколпероксидазы (КФ 1.11.1.7) определяли, используя в качестве донора водорода гваякол, в качестве субстрата - пероксид водорода. Оптическую плотность продукта окисления гваякола определяли при 470 нм. Активность СОД выражали в усл. ед./(г сырой массы х мин), каталазы - в ммоль Н202/(г сырой массы х мин), гваяколпероксидазы - в ммоль гваяко-ла/(г сырой массы х мин). Для определения теплоустойчивости проростков их подвергали повреждающему прогреву в водяном ультратермостате при температуре 45,0 ± 0,1 °С в течение 10 мин. После этого проростки всех вариантов переносили на очищенную воду. Через 3 суток оценивали относительное количество выживших проростков [22]. Состояние мембран клеток корней оценивали через 5 ч после повреждающего прогрева по выходу веществ, поглощающих в ультрафиолетовой области спектра (преимущественно свободных нуклеотидов) [25]. Корни интактных проростков погружали в стаканчики с дистиллированной водой на 1 ч, после чего отделяли от проростков и взвешивали. Оптическую плотность инкубационного раствора определяли при A252 и A264 на спектрофотометре СФ 46 («ЛОМО», Россия). Выход веществ рассчитывали как отношение усредненной величины, измеренной при указанных длинах волны, к массе корней и выражали в процентах к величинам, вычисленным для корней проростков, не подвергнутых повреждающему прогреву. Опыты проводили в 5-кратной биологической повторности и каждый независимо воспроизводили два раза. На рисунках и в таблице приведены средние арифметические величины и их стандартные ошибки (M ± mM). Статистическую значимость различий определяли с помощью 1-критерия Стью-дента. Кроме специально оговоренных случаев, обсуждаются эффекты, значимые при р < 0,05. Кальцийзависимое изменение активности антиоксидантных ферментов юд Результаты исследования Проведенное нами ранее исследование динамики содержания пероксида водорода в корнях проростков пшеницы при обработке 1 мМ путресцином показало, что уже через 1 ч после ее начала количество H2O2 увеличивалось. Максимальное повышение его содержания наблюдалось через 2 ч, через 4 ч содержание пероксида водорода в опытном варианте несколько снижалось, хотя и существенно превышало значения контроля, а к 24 ч от начала обработки почти возвращалось к величинам контрольного варианта [21]. В связи с этим влияние антагонистов кальция на проявление эффекта накопления пероксида водорода, вызываемого обработкой путресцином, оценивали через 2 ч после его воздействия на корни проростков. В это время в варианте с путресцином оно увеличивалось более чем на 30% (рис. 1). 0,18 г 1 2 3 4 5 6 Рис. 1. Содержание пероксида водорода (мкмоль/г сырой массы) в корнях проростков пшеницы при обработке путресцином и антагонистами кальция (M ± mM): 1 - контроль; 2 - путресцин (1 мМ); 3 - ЭГТА (500 мкМ); 4 - путресцин (1 мМ) + ЭГТА (500 мкМ); 5 - неомицин (200 мкМ); 6 - путресцин (1 мМ) + неомицин (200 мкМ). Одинаковыми латинскими буквами обозначены величины, различия между которыми статистически не значимы (p < 0,05) [Fig. 1. The content of hydrogen peroxide (^mol/g of fresh weight) in the roots of wheat seedlings when treated with putrescine and calcium antagonists (M±mM). 1 - Control; 2 - Putrescine (1 mM); 3 - EGTA (500 цМ); 4 - Putrescine (1 mM) + EGTA (500 цМ); 5 - Neomycin (200 цМ); 6 - Putrescine (1 mM) + neomycin (200 цМ). The data are expressed as the mean with standard error using Student’s f-test. The same Latin letters denote quantities between which differences are not significant (p < 0.05)] Обработка корней проростков хелатором внеклеточного кальция ЭГТА сама по себе вызывала небольшое, но статистически не значимое (р < 0,05) снижение содержания H2O2 в корнях. При комбинированной обработке ЭГТА и путресцином количество пероксида водорода в корнях не отлича- Ю.Е. Колупаее, А.И. Кокорев, М.А. Шклярееский 110 лось от величины контроля. Иными словами, обработка ЭГТА устраняла эффект повышения содержания H2O2 в тканях корней, вызываемый действием путресцина (см. рис. 1). Под влиянием другого антагониста кальция -неомицина - количество пероксида водорода в корнях не изменялось. Этот ингибитор поступления кальция в цитозоль из внутриклеточных компар-тментов не устранял и повышение содержания H2O2 в корнях в присутствии путресцина. Таким образом, усиление образования пероксида водорода в корнях, происходящее при их обработке путресцином, зависело в основном от поступления кальция в цитозоль из внеклеточного пространства. Обработка проростков путресцином вызывала изменение активности антиоксидантных ферментов в корнях. Так, уже через 4 ч после начала обработки отмечалось повышение активности СОД, каталазы и гваяколерокси-дазы (таблица). Еще более высокие значения активности СОД проявлялись через 24 ч инкубации проростков в среде с путресцином. Активность других исследуемых ферментов в этот период также была повышенной. Через 5 ч после повреждающего прогрева активность СОД и каталазы в корнях проростков контрольного варианта снижалась, а гваяколпероксида-зы - существенно не изменялась (см. таблицу). Активность антиоксидантных ферментов в корнях проростков пшеницы при обработке путресцином и действии теплового стресса [The activity of antioxidant enzymes in the roots of wheat seedlings during treatment with putrescine and the action of heat stress] (M±m^) Вариант [Sample] Фаза эксперимента [Experiment phase] Через 4 ч после начала обработки путресцином [4 hours after the start of treatment with putrescine] Через 24 ч после начала обработки путресцином [24 hours after the start of treatment with putrescine] Через 5 ч после повреждающего прогрева [5 hours after damaging warm-up] СОД, усл. ед./(г сырой массы • мин) [SOD, con. u./(g of fresh weight • min)] Контроль [Control] 22,8 ± 0,64 b* 22,6 ± 0,52 b 18,2 ± 0,62 c Путресцин (1 мМ) [Putrescine (1 mM)] 27,7 ± 0,71 a 29,8 ± 0,76 a 22,6 ± 0,66 b Каталаза (ммоль Н202/(г сырой массы • мин) [Catalase, mmol H2O2/(g of fresh weight • min)] Контроль [Control] 0,83 ± 0,05 b 0,80 ± 0,04 b 0,67 ± 0,03 c Путресцин (1 мМ) [Putrescine (1 mM)] 1,12 ± 0,04 a 1,17 ± 0,06 a 0,96 ± 0,06 ab Пероксидаза, ммоль тетрагваякола/(г сырой массы • мин) [Peroxidase, mmol tetra guaiacol/(g of fresh weight • min)] Контроль [Control] 0,110 ± 0,005 b 0,122 ± 0,004 b 0,104 ± 0,006 b Путресцин (1 мМ) [Putrescine (1 mM)] 0,143 ± 0,006 a 0,148 ± 0,004 a 0,139 ± 0,003 a * Одинаковыми латинскими буквами обозначены величины, различия между которыми не значимы приp < 0,05. [The same Latin letters denote quantities between which differences are not significant forp < 0.05]. Кальцийзависимое изменение активности антиоксидантных ферментов щ Рис. 2. Активность СОД (а), каталазы (b) и гваяколпероксидазы (с) в корнях проростков пшеницы при обработке путресцином и антагонистами кальция (M±mM): 1 - контроль; 2 - путресцин (1 мМ); 3 - ЭГТА (500 мкМ); 4 - путресцин 1 мМ) + ЭГТА (500 мкМ); 5 - неомицин (200 мкМ); 6 - путресцин (1 мМ) + неомицин (200 мкМ). Одинаковыми латинскими буквами обозначены величины, различия между которыми статистически не значимы (p < 0,05) [Fig. 2. SOD activity (a), catalase (b), and guaiacol peroxidase (c) in the roots of wheat seedlings when treated with putrescine and calcium antagonists (M±mM). 1 - Control; 2 - Putrescine (1 mM); 3 - EGTA (500 pM); 4 - Putrescine (1 mM) + EGTA (500 pM); 5 - Neomycin (200 pM); 6 - putrescine (1 mM) + neomycin (200 pM). The same Latin letters denote quantities between which differences are not significant (p < 0.05)] Ю.Е. Колупаее, А.И. Кокорев, М.А. Шклярееский 112 При этом в варианте с обработкой путресцином значения активности всех трех исследуемых ферментов существенно превышали соответствующие величины контроля. Рис. 3. Выход веществ, поглощающих в УФ-области спектра, из корней проростков пшеницы (а) и выживание проростков (b) после повреждающего прогрева (M ± mM): 1 - контроль; 2 - путресцин (1 мМ); 3 - ЭГТА (500 мкМ); 4 - путресцин (1 мМ) + ЭГТА (500 мкМ); 5 - неомицин (200 мкМ); 6 - путресцин (1 мМ) + неомицин (200 мкМ). Одинаковыми латинскими буквами обозначены величины, различия между которыми не значимы приp < 0,05 [Fig. 3. Yield substances, absorbing in the UV region of the spectrum, from the roots of wheat seedlings (a) and seedling survival (b) after a damaging heating (M ± mM). 1 - Control; 2 - Putrescine (1 mM); 3 - EGTA (500 цМ); 4 - Putrescine (1 mM) + EGTA (500 цМ); 5 - Neomycin (200 цМ); 6 - Putrescine (1 mM) + neomycin (200 цМ). The same Latin letters denote quantities between which differences are not significant for p < 0.05] Для оценки зависимости индуцирования антиоксидантных ферментов путресцином от кальциевого гомеостаза изучали влияние антагонистов Ca2+ на величины их активности через 24 ч после начала обработки путресцином или через 26 ч воздействия антагонистов кальция. Обработка корней ЭГТА Кальцийзависимое изменение активности антиоксидантных ферментов Ц3 существенно не влияла на наблюдаемые величины активности СОД, каталазы и гваяколпероксидазы (рис. 2). В то же время хелатор ионов кальция почти полностью устранял вызываемый путресцином эффект повышения активности всех трех исследуемых ферментов. Обработка проростков неомицином сама по себе существенно не влияла на активность СОД, каталазы и гваяколпероксидазы. Этот ингибитор почти не влиял и на проявление эффекта повышения активности СОД, вызываемого путресцином (см. рис. 2). Однако неомицин практически полностью нивелировал вызываемое путресцином повышение активности каталазы и гваяколпероксидазы. Действие на проростки теплового стресса вызывало повышение выхода из клеток корней веществ, поглощающих в области УФ, почти на 60% (рис. 3, а). Обработка путресцином способствовала сохранению целостности биомембран. Под влиянием антагонистов кальция ЭГТА и неомицина отмечалась тенденция к усилению повреждений мембран, хотя этот эффект был статистически не значимым (р < 0,05). При этом как ЭГТА, так и не-омицин нивелировали эффект снижения выхода веществ, поглощающих в УФ-В, вызываемый обработкой проростков путресцина. Антагонисты кальция сами по себе в условиях наших экспериментов практически не влияли на теплоустойчивость проростков пшеницы (рис. 3, b). Однако они практически полностью снимали эффект повышения выживаемости проростков после стресса, вызываемый обработкой путресцином. Таким образом, оба антагониста кальция (ЭГТА и неомицин) устраняли положительное влияние путресцина на состояние мембран и выживание проростков после теплового стресса. Обсуждение результатов исследования Полученные результаты свидетельствуют об участии кальция как сигнального посредника в реализации протекторного действия путресцина на проростки пшеницы при тепловом стрессе. По-видимому, ионы Ca2+ задействованы в процессе усиления образования пероксида водорода, происходящего при обработке корней путресцином и формировании АФК-сигнала. Об этом свидетельствует устранение индуцированного путресцином повышения содержания H2O2 хелатором кальция ЭГТА (см. рис. 1). Примечательно, что другой антагонист кальция - неомицин, который, ингибируя фосфолипазу C, угнетает поступление кальция в цитозоль из внутриклеточных компартментов [26], не влиял на эффект повышения содержания пероксида водорода в корнях при обработке путресцином. В литературе имеются немногочисленные и весьма неоднозначные сведения о влиянии полиаминов, в том числе путресцина, на кальциевый гомеостаз. Так, показано, что этот полиамин может активировать Са2+-насосы плазмалеммы и тем самым усиливать выход кальция из цитозоля во внекле- Ю.Е. Колупаее, А.И. Кокорев, М.А. Шклярееский 114 точное пространство [27]. С другой стороны, как отмечалось, происходящая при увеличении содержания полиаминов активация диаминоксидазы и по-лиаминоксидазы приводит к усилению образования АФК за счет окисления полиаминов [11]. При этом пероксид водорода и образующийся в результате неферментативных реакций гидроксильный радикал могут способствовать открыванию неселективных кальциевых каналов и поступлению кальция в цитозоль. Следует отметить, что ранее нами показано устранение вызываемого путресцином усиления образования пероксида водорода в корнях при их обработке ингибитором диаминоксидазы гуанидином, что указывает на значительный вклад этого фермента в индуцируемую путресцином генерацию АФК клетками корней проростков пшеницы [21]. Влияние кальция на активность диаминоксидазы у растений исследовано слабо. Хотя в корнях и побегах проростков гороха зарегистрировано повышение ee активности при обработке экзогенным Ca2+ (10 мМ) [28]. Похожие эффекты под влиянием экзогенного кальция обнаружены и у семядольных листьев сои [29], проростков конских бобов [30], клеток корнеплодов моркови [31]. Диаминоксидаза, генерирующая пероксид водорода, локализована в клеточных стенках [32]. Не исключено, что в ее активации задействован кальций, попадающий в апопласт при активации путресцином его выхода из клеток [27]. Кроме того, известна способность полиаминов вытеснять кальций из его комплексов с пектиновыми веществами клеточных стенок [33]. Тем не менее возможность прямой активации диаминоксидазы кальцием пока не доказана. В связи с этим для выяснения вопроса о том, требует ли вызываемый путресцином процесс активации диаминоксидазы ионов кальция, необходимы специальные исследования. Другим источником АФК, генерируемых при обработке корней проростков пшеницы путресцином, очевидно, является НАДФН-оксидаза. На это указывает существенное угнетение вызываемого путресцином увеличения содержания H2O2 в тканях корней под действием имидазола - ингибитора НАДФН-оксидазы [21]. Вполне вероятно, что открывание части кальциевых каналов под влиянием АФК, образующихся вследствие окисления путрес-цина диаминоксидазой, может приводить к активации НАДФН-оксидазы. Как известно, НАДФН-оксидаза может непосредственно активироваться ионами кальция при их присоединении к кальцийсвязывающим доменам, локализованным на цитозольной стороне белка [17, 34]. Показан эффект активации зависимой от НАДФН-оксидазы генерации супероксидного анион-радикала клетками колеоптилей пшеницы при их обработке кальциевым ионофором А23187 [18]. Поскольку, как обнаружено ранее, повышение содержания пероксида водорода в корнях под влиянием путресцина развивается во времени постепенно, можно предположить участие в этом процессе двух ферментов - диаминоксидазы и НАДФН-оксидазы [21]. Как уже упоминалось, о роли двух ферментов в процессе генерации АФК свидетельствуют и результаты ингибиторного анализа (угнетение образования пероксида Кальцийзависимое изменение активности антиоксидантных ферментов водорода под влиянием ингибиторов диаминоксидазы и НАДФН-оксидазы). В целом полученные результаты свидетельствуют, по крайней мере, о зависимости процесса усиления генерации АФК под влиянием путресцина от кальциевого гомеостаза. По-видимому, кальций задействован и в последующих процессах повышения активности антиоксидантных ферментов в ответ на обработку путресцином (см. рис. 2). Примечательно, что вызываемое экзогенным путресцином повышение активности СОД полностью устранялось ЭГТА, но не неомицином. Вероятно, данный процесс зависит в основном от поступления кальция из внеклеточного пространства. В то же время путресцин-индуцированное повышение активности двух других антиоксидантных ферментов - каталазы и гваяколпероксидазы - угнеталось не только ЭГТА, но и неомицином, что указывает на зависимость этого процесса от поступления кальция в цитозоль из внутриклеточных компартментов. Наконец, изменение интегральных показателей (стабильности биомембран и выживания проростков после повреждающего прогрева), вызываемое экзогенным путресцином, также зависит от поступления кальция в цитозоль, притом как из внеклеточного пространства, так и из внутренних компар-тментов. На это указывает практически полное нивелирование протекторных эффектов путесцина как ЭГТА, так и неомицином (см. рис. 3). Следует отметить, что феномен повышения стабильности биомембран при тепловом стрессе под влиянием экзогенного путресцина согласуется с результатами работы [20], в которой показано повышение содержания низкомолекулярных антиоксидантов в корнях и снижение в стрессовых условиях количества продукта пероксидного окисления липидов малонового диальдегида. Итак, индуцирование теплоустойчивости проростков пшеницы путрес-цином зависит от функционального взаимодействия между ионами кальция и АФК как сигнальными посредниками. Заключение Последовательность развития процессов в тканях корней проростков пшеницы в ответ на обработку путресцином можно представить в виде следующей гипотетической схемы: повышение концентрации путресцина во внеклеточном пространстве ^ активация диаминоксидазы и изменение содержания кальция в апопласте ^ повышение содержания АФК в апопла-сте ^ открывание кальциевых каналов ^ повышение [Са2+]цит ^ увеличение активности НАДФН-оксидазы ^ усиление генерации АФК и поступление их в цитозоль (в первую очередь H2O2) ^ дополнительная модификация кальциевого гомеостаза ^ формирование Ca2+- и АФК-сигналов, усиливающих экспрессию генов антиоксидантных ферментов ^ активация ферментативной антиоксидантной и других протекторных систем ^ повышение теплоустойчивости. Безусловно, для подтверждения такой последователь- Ю.Е. Колупаее, А.И. Кокорев, М.А. Шклярееский 116 ности развития событий необходимы специальные исследования, в частности, непосредственное изучение динамики активности диаминоксидазы и НАДФН-оксидазы, исследование механизма влияния кальция на активность диаминоксидазы, определение экспрессии генов антиоксидантных ферментов и ее зависимости от кальциевого гомеостаза при действии путресцина.

Скачать электронную версию публикации